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EDTA与羟基磷灰石结晶的外层钙结合，形成可溶性的非离子化合物，同时又促进晶体内层的结合钙向外转移。借助这种连续性的作用使羟基磷灰石晶体逐渐融解，且pH中性时可起螯合作用。

• 用于骨组织、牙齿等脱钙。
  
• 对骨组织的损伤极小，不产生气泡，不影响染色，酶活性(碱性磷酸酶)和细胞抗原性保存较好。

• 脱钙时间以大头针能刺进骨密质为完成脱钙标准。
  
• 脱钙温度不要太高，一般以室温(25℃)为宜，高温可加快脱钙速度，但会破坏组织中的核酸而影响染色效果。低温(4℃)则会减慢脱钙速度，可能使组织因在脱钙液中浸泡过久而损伤。
  
• 为了提高EDTA的脱钙速度，骨组织取材尽量薄。
  
• 为了提高EDTA的脱钙速度，也可以采用微波脱钙。用微波炉辅助脱钙可以大大缩短脱钙时间，以微波间歇脱钙，每次辐射1min，后室温冷却5min，以保证每次微波辐射脱钙液的温度不至于太高(70℃)。脱钙时，脱钙液温度过高易导致假阴性、染色背景深等结果。因此，在时间要求不紧迫的前提下，该方法也不应是首选。
  
• 为了您的安全和健康，请穿戴实验服及一次性手套进行操作。

• 将骨组织截成0.5×0.3×0.2cm大小的骨片，生理盐水清洗后立即投入冷冻的固定液中，4℃固定12～24h；固定结束后骨片在0.2M PBS中充分漂洗。
  
• 漂洗后投入脱钙液中，室温下脱钙，每日检查脱钙情况，直至骨片脱钙完全为止，脱钙结束后，骨片用蒸馏水冲洗20min。
  脱钙液每隔4～5天更换一次新液，经过3次更换新液后，建议每天更换一次新液，但请根据具体实验具体分析，以大头针能刺进骨密质为完成脱钙标准。
  
• 进入常规脱水处理程序并包埋和切片。